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彩客网 >>> 技术文章 >>> 血清使用和处理中的常见问题

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1.保存血清较好的方法
    建议血清应保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。 
2.如何解冻血清才不会使产品品质受损 
    将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。 
3.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理
    血清中沉淀物的出现有许多种原因,但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的品质。 
    欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。不建议以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。 
4.为什么要热灭活血清
    加热可以灭活补体系统。启动的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,启动淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞,昆虫细胞和平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。 
5.有必要做热灭活吗
    实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的品质,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,如同“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。因此,除非必须,尽可能不需要做热处理这一步。
6.为什么储存在冰箱中的胎牛血清会出现沉淀
    储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。这应该不会影响血清的品质。建议在-20℃储存胎牛血清,避免反复冻融。 
7.如何避免沉淀物的产生
    解冻血清时,请按照所建议的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变的温度太大(如-20℃至37℃),实验显示非常容易产生沉淀物。 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。 请勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清会变得混浊,同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害,而影响血清的品质。 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

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